RNA ထောက်လှမ်းမှုအတွက် RT-PCR တုံ့ပြန်မှု၏ အာရုံခံနိုင်စွမ်းကို မြှင့်တင်နည်း

မျိုးရိုးဗီဇလေ့လာမှုများပြုလုပ်သည့်လုပ်ငန်းစဉ်တွင်၊ ဥပမာအားဖြင့်၊ သေးငယ်သောခန္ဓာဗေဒဆိုင်ရာပါးစပ်အကျိတ်များ၊ ဆဲလ်တစ်ခုတည်းနမူနာများနှင့် လူသားဆဲလ်များတွင် အလွန်နိမ့်ကျသောအဆင့်တွင် ကူးယူဖော်ပြသည့် မျိုးရိုးဗီဇပြောင်းလဲမှုနမူနာများကို လေ့လာရန်အတွက် မလုံလောက်သော RNA နမူနာများကို မကြာခဏကြုံတွေ့ရသည်။ဟုတ်ပါတယ်၊ COVID-19 စစ်ဆေးမှုအတွက်၊ နမူနာယူနေစဉ်အတွင်း swabs များသည် မှန်ကန်သောနေရာတွင်မရှိခြင်း သို့မဟုတ် လုံလောက်သောအချိန်မရှိပါက၊ နမူနာအရွယ်အစားသည် အလွန်နည်းပါးသွားလိမ့်မည်ဖြစ်သောကြောင့် ကျန်းမာရေးနှင့် မိသားစုစီမံကိန်းကော်မရှင်က လွန်ခဲ့သောနှစ်ရက်က ထွက်ပေါ်လာခဲ့ခြင်းဖြစ်ပြီး၊ စမ်းသပ်မှုအောင်မြင်ပြီး nucleic acid sampler သည် နမူနာခြောက်ခုကိုမယူခဲ့ပါက ၎င်းကို သတင်းပို့နိုင်ပါသည်။

ကျွန်ုပ်တို့တွင် ဤပြဿနာ သို့မဟုတ် ထိုပြဿနာရှိသောကြောင့် ဓာတ်ပစ္စည်းများ၏ အာရုံခံနိုင်စွမ်းသည် အရေးကြီးသည်၊ ထို့ကြောင့် RT-PCR ၏ အာရုံခံနိုင်စွမ်းကို မြှင့်တင်ရန် ကျွန်ုပ်တို့ ဘာလုပ်နိုင်သနည်း။

ဖြစ်နိုင်ချေရှိတဲ့ ဖြေရှင်းနည်းတွေကို မဆွေးနွေးခင်မှာ အခုဖော်ပြခဲ့တဲ့ အခြေအနေနဲ့ ကြီးမားတဲ့ ရှုပ်ထွေးမှုတွေ နှစ်ခုကို ပြောကြည့်ရအောင်။

ပထမဦးစွာ၊ ကျွန်ုပ်တို့၏နမူနာတွင် ကျွန်ုပ်တို့၌ ဆဲလ်လူဦးရေအနည်းငယ်သာရှိသောအခါ RNA ဆုံးရှုံးမှုအတွက် ကျွန်ုပ်တို့စိုးရိမ်ပါသည်။ကော်လံနည်းလမ်း သို့မဟုတ် nucleic acid မိုးရွာသွန်းမှုနည်းလမ်းကဲ့သို့ ရိုးရာခွဲထုတ်ခြင်းနှင့် သန့်ရှင်းရေးနည်းလမ်းများကို အသုံးပြုပါက နမူနာအနည်းငယ် ဆုံးရှုံးနိုင်ခြေ မြင့်မားပါသည်။ဖြေရှင်းချက်တစ်ခုသည် tRNA ကဲ့သို့သော သယ်ဆောင်သူ မော်လီကျူးတစ်ခုကို ပေါင်းထည့်ရန်ဖြစ်သည်၊ သို့သော်ငြားလည်း ကျွန်ုပ်တို့၏ ပြန်လည်ရယူခြင်းစမ်းသပ်မှုမှာ ကောင်းမွန်ကြောင်း အာမခံချက်မရှိပါ။

ဒါဆို ပိုကောင်းတဲ့နည်းလမ်းက ဘာလဲ။မွေးမြူထားသောဆဲလ်များ သို့မဟုတ် သေးငယ်သောခန္ဓာဗေဒနမူနာများအတွက် ကောင်းသောရွေးချယ်မှုမှာ တိုက်ရိုက် lysis ကိုအသုံးပြုခြင်းဖြစ်သည်။

အိုင်ဒီယာမှာ ဆဲလ်များကို 5 မိနစ်ခန့်ခွဲ၍ RNA ကိုဖြေရှင်းချက်ထဲသို့ထုတ်လွှတ်ကာ တုံ့ပြန်မှုကို 2 မိနစ်ကြာရပ်တန့်ရန်၊ ထို့နောက် RNA ပျောက်မသွားစေရန် lysate ကို တိုက်ရိုက်ထည့်ကာ ရလဒ် cDNA ကို တိုက်ရိုက်ထည့်ပါ။ real-time တုံ့ပြန်မှုထဲသို့။

သို့သော်၊ ကန့်သတ်စမှတ်တစ်ခု သို့မဟုတ် ပစ်မှတ်မျိုးဗီဇဖော်ပြမှုပမာဏ အနည်းငယ်ကြောင့်၊ ကျွန်ုပ်တို့သည် RNA အားလုံးကို ပြန်လည်အသုံးပြုနိုင်ပြီး အချိန်နှင့်တစ်ပြေးညီ အချက်ပြမှုကောင်းတစ်ခုရရှိရန် လုံလောက်သောပုံစံများကို မပံ့ပိုးနိုင်သေးပါက အဘယ်နည်း။

ဤကိစ္စတွင်၊ ကြိုတင်ချဲ့ထွင်ခြင်းအဆင့်သည် အလွန်အသုံးဝင်ပါသည်။

အောက်ပါတို့သည် ပြောင်းပြန်ကူးယူဖော်ပြပြီးနောက် sensitivity တိုးမြှင့်ရန် အစီအစဉ်တစ်ခုဖြစ်သည်။မစတင်မီ၊ ကျွန်ုပ်တို့စိတ်ဝင်စားသည့် မည်သည့်ပစ်မှတ်များကို ရေအောက်ပိုင်းမှ မေးမြန်းရန် လိုအပ်ပြီး ဤပစ်မှတ်များအတွက် တိကျသော primer များကို ဒီဇိုင်းထုတ်ရန် လိုအပ်ပါသည်။

primer အတွဲ 100 အထိ ပေါင်းစပ်ထားသော primer ကို ဖန်တီးပြီး တုံ့ပြန်မှု စက်ဝန်း 10 မှ 14 ကြိမ် ပြုလုပ်ခြင်းဖြင့် ၎င်းကို အောင်မြင်နိုင်ပါသည်။ထို့ကြောင့်၊ ရရှိထားသော cDNA ကို ကြိုတင်ချဲ့ထွင်ရန်အတွက် ဤလိုအပ်ချက်အတွက် အထူးထုတ်လုပ်ထားသော Master Mix တစ်ခု လိုအပ်ပါသည်။

10 နှင့် 14 ကြား သံသရာ အရေအတွက်ကို သတ်မှတ်ရခြင်း၏ အကြောင်းရင်းမှာ အရေအတွက် မော်လီကျူး အချက်အလက် လိုအပ်သော သုတေသီများအတွက် အရေးကြီးသော အရေအတွက် မော်လီကျူး အချက်အလက် လိုအပ်သော သုတေသီများအတွက် အမျိုးမျိုးသော ပစ်မှတ်များကြား ကျပန်းကျပန်း လည်ပတ်မှု ကန့်သတ်ထားသော အရေအတွက်ကို သေချာစေသောကြောင့် ဖြစ်သည်။

ကြိုတင်ချဲ့ထွင်ပြီးနောက်၊ ကျွန်ုပ်တို့သည် ကြီးမားသော cDNA ပမာဏကို ရနိုင်သည်၊ ထို့ကြောင့် back-end ရှိ ထောက်လှမ်းမှု အာရုံခံနိုင်စွမ်းကို အလွန်တိုးတက်ကောင်းမွန်စေပြီး၊ နမူနာကိုပင်မှေးမှိန်စေပြီး ဖြစ်နိုင်သော ကျပန်းအမှားများကို ဖယ်ရှားရန် အချိန်နှင့်တပြေးညီ PCR တုံ့ပြန်မှုများစွာကို လုပ်ဆောင်နိုင်ပါသည်။